Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Содержание
  1. Ложноположительный анализ на ВИЧ: причины, болезни схожие по симптомам, ошибка лаборатории, сдача анализа – Венерические заболевания
  2. Причины
  3. Болезни со схожими симптомами
  4. Ложноположительный тест на ВИЧ по причине медицинских работников
  5. Ложноположительный анализ в период гестации
  6. Как подготовиться для точного результата
  7. Статистика по обнаружению инфекции после инфицирования
  8. Повторный анализ
  9. Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ
  10. Положительные пробы
  11. Негативный результат
  12. Неинтерпретируемые результаты
  13. Линейный метод
  14. Диагностика ВИЧ у новорожденных
  15. Исследование при беременности
  16. Могут ли быть ошибки на иммуноблоте вич
  17. Особенности
  18. Показания к назначению
  19. Как проводится исследование?
  20. Какие стадии включает иммуноблот?
  21. Как расшифровать анализ?
  22. Насколько достоверен положительный результат теста?
  23. Что такое неопределенный (сомнительный) результат?
  24. Сколько стоит анализ?
  25. Где сделать анализ?
  26. Источники
  27. Иммуноблоттинг на ВИЧ – что это, для чего, когда нужен, результаты
  28. Иммуноблоттинг – что это
  29. Как проводится
  30. Ифа и иммуноблоттинг на вич
  31. В каких случаях назначается анализ
  32. Иммуноблоттинг на ВИЧ – где сдать
  33. Как проводится анализ на ВИЧ
  34. Как подготовится к обследованию
  35. Иммуноблоттинг – цена
  36. Тесты для диагностики ВИЧ
  37. Иммуноблоттинг – расшифровка результатов
  38. Иммуноблоттинг при беременности
  39. Типичные ошибки при диагностике ВИЧ
  40. Диагностика СПИДа иммуноблотом на ВИЧ. Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Ложноположительный анализ на ВИЧ: причины, болезни схожие по симптомам, ошибка лаборатории, сдача анализа – Венерические заболевания

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

В настоящее время актуальной является проблема СПИДа и ВИЧ. Ежегодно увеличивается количество заболевших людей, поэтому очень важно провести своевременную диагностику данного заболевания. Поскольку главным материалом, который является проводником вируса от зараженного человека к здоровому, является сперма и кровь, важен правильный анализ данных биологических жидкостей.

Иногда вследствие различных факторов может случаться явление, как ложноположительный анализ на ВИЧ. Примечательно, что такой показатель может обнаруживаться даже у тех людей, которые не вступают в беспорядочные половые связи либо никогда не употребляли наркотические вещества. Почему так случается, следует разобраться подробнее.

Причины

Если обнаруживается ложноположительный анализ на вич причины такого явления бывают различными. Идеальным выступает анализ крови на вич, при котором точность определения составляет 100%.

 По мнению специалистов, ложноположительный результат на вич чаще всего наблюдается в том случае, если человек проводит анализы на вич посредством аптечного теста в домашних условиях.

 Чтобы уберечься от ошибок, рекомендуется проходить диагностику в специальных учреждениях, причем такая диагностика обычно отличается анонимностью.

На то, что возникает ложный результат либо сомнительный результат могут повлиять такие причины:

  • ошибочным может быть анализ у мужчин либо у женщин при наличии каких-либо перекрестных реакций;
  • у женщины во время вынашивания малыша, в категорию риска входят те дамы, которые ранее рожали не один раз;
  • если человек неоднократно выступал донором сдачи крови и ее компонентов;
  • если активно развивается вирус гриппа либо простого герпеса, независимо от того, имеются клинические проявления либо нет;
  • имеющиеся патологические процессы инфекционного генезиса в органах верхней дыхательной системы;
  • болезни, которые могут спровоцировать повышенную густоту кровяной жидкости;
  • начальный этап аутоиммунных болезней;
  • проникновение в организм вируса герпеса либо возбудителя туберкулеза;
  • трудности со свертываемостью кровяной жидкости, в преимущественном количестве случаев вследствие определенного генетического заболевания;
  • на момент прохождения диагностики у человека была лихорадка различного генезиса;
  • человек страдает артритом;
  • онкологические процессы, независимо от стадии их развития;
  • ранее перенесенная трансплантация органа;
  • патологические процессы в сосудистой системе;
  • склеротические изменения в организме любой формы;
  • если женщина принимает гормональные контрацептивы или противозачаточные таблетки;
  • критические дни у женщины;
  • усиление уровня билирубина в кровяной жидкости;
  • алкогольная интоксикация печени;
  • употребление наркотиков либо марихуаны.

Также можно отметить большое количество процессов в организме, которые могут повлиять на получение ложноположительного результата, сказаться на анализе. К таким процессам относится выброс в кровяную жидкость гистаминов при развитии аллергической реакции. В данном случае появляются антигены, они естественной защитной системой могут быть распознаны в качестве чужеродных.

При гестации определение точного диагноза первично осложняется кардинальными перестройками. Но такое состояние отмечается не у всех беременных женщин. Также во время менструации не рекомендуется проводить подобные исследования, поскольку в анализе могут присутствовать ложноположительные результаты.

При наличии любых заболеваний инфекционного, грибкового либо вирусного генезиса, можно утверждать о том, что результаты будут ложноположительными. Поэтому специалисты рекомендуют сдавать такие анализы на инфекции только после окончания курса лечения, не ранее, чем спустя три недели.

При наличии любых онкологических процессов в организме, при повышенном уровне билирубина, результат будет неправильным. Вследствие перечисленных факторов, первичный положительный анализ не всегда оглашается врачом пациенту, а рекомендуется выяснить, были ли причины такого показателя. После чего повторно сдать материал на исследование.

Практически во всех случаях трансплантации органов анализ на ВИЧ положительный. В частности, в тот промежуток времени, когда пересаженный орган адаптируется в организме. Очень важно перед тем, как сдавать материал на исследование, ознакомиться с факторами, которые могут повлиять на конечный результат, исключить их и правильно подготовиться.

Болезни со схожими симптомами

Есть определенные болезни похожие на спид по своим клиническим проявлениям. В таком случае можно перепутать с другим заболеванием вич, поскольку симптомы похожие, но не свидетельствуют о развитии недуга.

Схожие с синдромом приобретенного иммунодефицита симптомы при следующих заболеваниях:

  • Менингит. Характеризуется развитием воспалительного процесса мягких оболочек головного и спинного мозга, возбудителем которого является вирус либо инфекция. Если своевременно оказанная терапия отсутствует, могут возникать определенные последствия в виде утраты качества слуха, речи, зрения и других жизненно важных функций.
  • Ранние этапы развития ВИЧ-инфекции проявляются симптомами, которые похожи на грипп либо простуду – гипертермия, увеличение регионарных лимфатических узлов, слабость, повышенная утомляемость, сухой кашель.
  • Коклюш. Имеет бактериальное происхождение, проявляется схожими симптомами с ВИЧ на начальном этапе развития.
  • Туберкулез. Проявляется субфебрильной гипертермией, общей слабостью, головными болями.
  • Гепатит А проявляется недомоганием, гипертермией, ухудшением аппетита, тошнотой, тяжестью и болью в правом боку.

Ложноположительный тест на ВИЧ по причине медицинских работников

Возможна ли ошибка со стороны сотрудников лаборатории? Иногда ложноположительный результат вич может наблюдаться по вине медицинских работников, которые неправильно взяли материал либо интерпретировали значение.

Такие критерии бывают спровоцированы следующими причинами:

  • отсутствие правильной транспортировки забранного материала;
  • использование плохо обработанной сыворотки для проведения анализа ИФА;
  • отсутствие условий для правильного хранения материала;
  • погрешности и ошибки в процессе взятия материала.

Осуществляя недобросовестные манипуляции и процедуры, безграмотные работники медицинского учреждения сеют сомнения относительного социального развития индивидуума. Следует учитывать, что не все лаборатории и медицинские центры способны допустить оплошности.

В настоящее время большинство диагностических центров снабжено высококачественным оборудованием, благодаря которому можно осуществлять полную и расширенную диагностику, чтобы подтвердить либо опровергнуть присутствие инфекции.

Ложноположительный анализ в период гестации

Анализ на вич при беременности является очень важным составным этапом диагностических мероприятий на момент постановки на учет, перед родами. Случается в определенных ситуациях сомнительный результат на вич при беременности.

Ложноположительный тест на вич при беременности у женщин способен возникать в двух ситуациях:

  • Кардинальная перестройка в гормональной системе в момент прикрепления зародыша, зарождения эмбриона вследствие смешения женских и мужских генов.
  • Нервное перенапряжение у беременных, нервная нагрузка также могут провоцировать неправильные показатели.

Чтобы подтвердить либо опровергнуть полученные данные, женщине нужно будет обследоваться повторно.

Как подготовиться для точного результата

Спустя 6-12 недель после того, как произошел сомнительный контакт, рекомендуется сдать анализ ИФА. Именно в течение этого периода можно обнаружить антитела вируса в организме.

Перед тем, как сдать кровь на ВИЧ, следует воздержаться от острых, жареных, кислых, соленых блюд, алкогольных напитков, наркотических веществ.

Не вступать в половые контакты в течение двух-трех недель до дня забора крови. Сдавать материал только натощак.

Статистика по обнаружению инфекции после инфицирования

Как часто обнаруживается положительный, сомнительный либо ложный результат, каков процент ложноположительного результата на вич? По данным МОЗ России, проведена диагностика на наличие антител к ВИЧ 28 327 314 исследуемых. Позитивный критерий в ИФА (иммуноферментный анализ) выявлен у 271 408 из общего количества испытуемых.

Позитивный показатель в ИБ (иммунный блотинг) выявлен у 103 168 из исследуемых.

Лишь в 38% ситуаций позитивный показатель в ИФА дополняется таким же в ИБ. В иных 62% ситуаций позитивный ИФА ложноположительный.

Во время расшифровки полученных данных, позитивный показатель на ВИЧ определяется:

  • от 60% до 65% через 28 дней после заражения;
  • в 80% — через 42 дня;
  • в 90% — через 56 дней;
  • в 95% — через 84 дня.

Повторный анализ

Повторный анализ вич назначается, если есть сомнительный либо ложноположительный показатель. Проводить повторное исследование специалисты рекомендуют два раза. Также есть необходимость повторных исследований через полгода, чтобы исключить наличие инфекции в организме в ситуации получения неточного результата.

Во время расшифровки показатели антител будут завышены при наличии ложноположительного результата.

Для исследования пациента проводятся такие варианты:

  • анализ ИФА – иммуноферментный анализ
  • метод иммуноблоттинг.

Первый метод целесообразно использовать для определения количества антител. Но данный вариант диагностики обычно для постановки конкретного диагноза должен дополняться полной картиной обследований.

Наиболее развернутым анализом кровяной жидкости является иммуноблоттинг. Именно с его помощью подтверждается либо опровергается наличие инфекции в организме. После проведения забора материала нужно будет подождать 21 день, после чего пациент получает информацию о показателях.

Источник: https://ozppp.com/vich/lozhnopolozhitelnyy-analiz-na-vich-prichiny-bolezni-shozhie-po-simptomam-oshibka-laboratorii-sdacha-analiza.html

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Иммуноблот на ВИЧ позволяет обнаружить антитела к вирусным белкам, помещенным на специальную нитроцеллюлозную мембрану. Это высокоточное исследование, устанавливающее наличие фракций, в которых основные белки располагаются в виде небольших полос.

Оболочка вируса ВИЧ-1 содержит гликопротеины с молекулярной массой от 41 кд до 160 кд (килодальтона). Большое значение для проведения иммунного блоттинга имеет гликопротеин ВИЧ-2 с молекулярным весом от 32 кд до 140 кд. Белки сердцевины ВИЧ-1 и ферменты вируса представлены протеинами р17, р24, р55.

Возбудитель ВИЧ-2 состоит из белков, обозначаемых как р16, р25, р56. Они образуют его внутреннюю оболочку. В состав генома входят 6 регуляторных и 3 структурных гена. Нередко при делении клеток возникают генетические неточности и появляется несколько подтипов возбудителя.

Положительные пробы

Для исключения ошибок при лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции пациенту назначают дополнительное исследование. Его результаты интегрируются как положительные, если обнаружены антитела к 2 или 3 белкам ВИЧ-1 или ВИЧ-2.

Иммуноблот подтверждает все хорошие результаты ИФА. В этом случае обнаруживают антитела к gp120/160, gp41 или р24, которые являются структурными единицами трех основных генов СПИДа — gag, pol, and env.

У некоторых пациентов, имеющих отрицательные результаты ИФА и ПЦР, иммуноблот показывает несколько положительных полосок.

[attention type=yellow]

Врач назначает дополнительное исследование р24 для постановки правильного диагноза и исключения ранней фазы ВИЧ-инфекции.

[/attention]

Если полученные результаты подвергаются сомнению, больному предлагают повторять сдачу анализа в течение последующих 3 месяцев. Почти все случаи заболевания ВИЧ подтверждают с помощью системы для проведения иммуноблота — прибора Sanofi.

В большинстве случаев обнаруживают антигены ВИЧ, белки р25, gp110/120 и gp160, указывающие на инфицирование вирусом.

[attention type=green]

Ложноположительная проба регистрируется у пациентов, страдающих заболеваниями соединительной ткани, имеющих повышенный уровень билирубина, при взаимодействии с различными вирусными антигенами.

[/attention]

Негативный результат

В случае недостатка положительных линий, соответствующих белкам вируса СПИДа, иммуноблот расшифровывают как отрицательный результат. Анализ однозначно подтверждает отсутствие заражения вирусом иммунодефицита или указывает на «период окна». Если иммуноблот дает отрицательный результат, человек не является носителем вируса СПИДа.

Для исследования берут образцы сыворотки крови ВИЧ-инфицированных пациентов. Их хранят в замороженном виде при температуре -20°С. Анализ проводят с помощью тест-систем:

  • Антиген;
  • Рекомбинат-ВИЧ;
  • Пептоскрин.

Регистрация отрицательного результата указывает на отсутствие в сыворотке антител к оболочечным гликопротеинам ВИЧ gp120, gp160, Sp41.

Нередко больного интересует вопрос, может ли быть отрицательный результат иммуноблота на ВИЧ у пациента, имеющего инфицированного сексуального партнера.

После проведенного исследования нередко получают сомнительный результат или фиксируются антитела к белкам gp120 и gp160, что указывает на полное отсутствие отрицательных данных.

Иногда сомнительный ответ регистрируют у пациентов с бессимптомно протекающей инфекцией.

Неинтерпретируемые результаты

Анализ, проведенный с помощью различных тестов на антитела к ВИЧ-инфекции, иногда не соответствует отрицательным данным и не отвечает критериям серопозитивности. Врачу трудно установить причину появления сомнительного результата.

Некоторые больные не входят в группу риска по инфицированию ВИЧ. Врач может ошибаться в интерпретации результатов исследования в том случае, если инфицирование вызвано другим серотипом.

Сыворотку крови пациента необходимо исследовать в динамике. Если в течение 6 месяцев не наблюдают клинических проявлений СПИДа и отсутствуют факторы риска, у больного регистрируют отсутствие инфекции.

[attention type=red]

Сомнительные результаты анализа получают у пациентов, имеющих низкий риск инфицирования. В некоторых случаях появление неясных данных вызывают содержащиеся в сыворотке крови иммунные комплексы и аутоантитела.

[/attention]

У некоторых больных возникновение сомнительных результатов вызвано развитием патологических процессов:

  • инфекционных заболеваний;
  • раковой опухоли;
  • аллергической реакции.

У больного появляются изменения в клиническом анализе крови, наблюдают рост С-реактивного белка или повышение СОЭ. У людей, страдающих инфекционными заболеваниями, часто выявляют сомнительную реакцию иммуноблота на ВИЧ.

Пациенты с неопределенными результатами не могут являться донорами крови и биологических материалов.

Линейный метод

Принцип иммуноблоттинга включает:

  1. Использование нативного вирусного вещества ВИЧ-формат или антигенов в формате Western -Blot.
  2. Соединение белков ВИЧ с отдельными антителами, выявленными в сыворотке крови.
  3. Процесс инкубации, происходящий с добавлением меченных антител к человеческим Ig.
  4. Расшифровку окрашенных полос.

Анализ позволяет врачу своевременно провести интерпретацию результатов исследования. Положительный блот расшифровывают как 2ENV+/- GAG+/POL, неопределенный — 1 ENV+/- GAG+/POL. Отрицательный результат предусматривает отсутствие полос.

Для выполнения анализа применяют рекомбинантный и лизатный иммуноблот. Исследование является специфичным и составляет 99,5%.

Может ли результат анализа быть расшифрован как ложный, интересуются больные. Полученные данные могут быть сформированы в результате стимуляции защитных сил организма (беременности, гемодиализа).

При подозрении на острый ретровирусный синдром и контакт с больным ВИЧ-инфекцией пациенту рекомендуют сдать сыворотку на реакцию ПЦР.

Повторное серологическое исследование подтверждается путем измерения вирусной нагрузки в представленном образе биологического материала.

Диагностика ВИЧ у новорожденных

Анализ на СПИД у ребенка раннего возраста проводят в том случае, если установлен контакт с ВИЧ-инфицированной матерью. Серологические реакции могут быть положительными в течение 1,5 лет. Антитела в сыворотке крови новорожденного обнаруживают с помощью реакций ИФА, РИФ и иммунного блоттинга.

В течение 9 месяцев жизни ребенка положительный результат появляется в связи с наличием в сыворотке крови антител матери. Антиген р24 имеет специфичность около 65%.

[attention type=green]

В некоторых случаях не удается обнаружить антитела у больного ребенка, если у него диагностировано врожденное низкое содержание глобулинов в крови.

[/attention]

Установленный отрицательный результат иммуноблота не является гарантией отсутствия инфекции.

Тестирование проводят в несколько этапов:

  • на 1-2 сутки после рождения;
  • в 1-2 месяца;
  • в полугодовалом возрасте.

Дальнейшее изучение антител проводят до тех пор, пока не будут получены 2 отрицательных результата иммуноблота. Установление диагноза СПИД у ребенка, рожденного от ВИЧ-инфицированной женщины, возможно на основании 2 положительных результатов реакции ПЦР. Передача новорожденному возбудителя ВИЧ-инфекции исключена, если женщина не кормит ребенка грудью.

Исследование при беременности

Будущей матери назначают иммунный и линейный блоттинг, если получен положительный результат на ВИЧ методом ИФА. Если блот подтвержден, пациентка больна СПИДом. В этом случае начиная с 14 недели беременности назначают терапию, предупреждающую инфицирование ребенка.

Может ли ошибиться специалист при выполнении исследования сыворотки крови во время беременности, спрашивают пациентки у лечащего врача. Он обязан выдать на руки беременной женщине копии анализов ПЦР, ИФА для устранения сомнений в их достоверности.

При постановке иммуноблота иногда возникают проблемы, но если ИФА, блот и ПЦР — положительные, диагноз ВИЧ-инфекции подтверждается окончательно. Вероятность получения ложноположительного анализа при беременности велика. В случае если ИФА (+), а иммуноблот (-), женщине предлагают пересдать сыворотку крови.

В обменной карте беременной указывают результат исследования. При его положительном значении женщине запрещают кормить ребенка после родов, чтобы не заразить вирусом СПИДа. Окончательные выводы делают на основании лабораторных, клинических и эпидемиологических исследований. Только после их расшифровки больному ставят диагноз «ВИЧ-инфекция».

Источник: https://krov.expert/analiz/venerologiya/immunoblot-na-vich.html

Могут ли быть ошибки на иммуноблоте вич

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

[contact-form-7 404 "Not Found"]

Иммуноблоттинг (иммуноблот) – высокоспецифичный и высокочувствительный референтный метод, подтверждающий диагноз для пациентов с положительными или неопределенными результатами анализов, полученных в т.ч. при помощи РПГА или ИФА.

Этот метод выявления антител к отдельным антигенам возбудителя основан на постановке ИФА на нитроцеллюлозных мембранах, на которые в виде отдельных полос нанесены специфические белки, разделенные гель-электрофорезом.

Если имеются антитела против определенных антигенов – появляется темная линия в соответствующем локусе стрипа. Уникальность иммуноблота заключается в его высокой информативности и достоверности получаемых результатов.

Материалом для исследования является сыворотка или плазма крови человека. Для исследования на одном стрипе необходимо 1,5-2 мл крови или 15-25 мкл сыворотки.

По рекомендации ВОЗ иммуноблотинг (вестерн-блот) используется при диагностике ВИЧ-инфекции в качестве дополнительного экспертного метода, который должен подтверждать результаты ИФА. Обычно этим методом перепроверяют положительный результат при ИФА, поскольку он считается более чувствительным и специфичным, хотя более сложным и дорогим.

Иммунный блоттинг сочетает в себе иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим разделением белков вируса в геле и их переносом на нитроцеллюлозную мембрану. Процедура иммуноблота состоит из нескольких стадий.

Сначала предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов ВИЧ подвергается электрофорезу, при этом все входящие в состав вируса антигены разделяются по молекулярному весу.

[attention type=yellow]

Затем методом блоттинга антигены переносят из геля на полоску нитроцеллюлозы или нейлонового фильтра, которые отныне содержат невидимый пока глазом спектр белков, характерный для ВИЧ. Далее на стрип наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.

[/attention]

), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им полосками белков-антигенов. В результате последующих манипуляций (подобных ИФА) результат этого взаимодействия визуализируется – делается видимым. Наличие полос на определённых участках стрипа подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ.

Иммунный блоттинг чаще всего используют для подтверждения диагноза ВИЧ-инфекции. ВОЗ считает положительными сыворотки, в которых методом иммунного блотинга обнаруживаются антитела к каким-либо двум белкам оболочки ВИЧ.

Согласно этим рекомендациям, при наличии реакции только с одним из белков оболочки (gp160, gp120, gp41) в сочетании или без реакции с другими белками, результат считается сомнительным и рекомендуется повторное исследование, с использованием набора другой серии или другой фирмы.

Если и после этого результат остается сомнительным, исследования продолжаются через каждые 3 месяца.

Особенности

Иммуноблот анализ – достоверный метод, который позволяет определить наличие антител к антигенам ВИЧ первого и второго типа. Если человек инфицирован, уже через две недели появляются антитела, которые могут обнаруживаться и намного позднее.

Особенность ВИЧ в том, что количество антител быстро увеличивается и сохраняется в крови больного. Даже если они присутствуют, болезнь может не проявлять себя в течение двух и более лет.

Метод ИФА не всегда точно определяет наличие заболевания, поэтому требуется подтверждение результатов с помощью иммуноблоттинга и ПЦР, если иммуноферментный анализ показал положительный результат.

Показания к назначению

Что это такое «иммуноблот» уже выяснили, но кому назначают данное исследование? Поводом сдать анализы на вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) методом иммуноблоттинга становится положительный результат ИФА.

Необходимо пройти через иммуноферментный анализ пациентам, которые будут оперироваться. Кроме этого, следует сделать анализ женщинам, планирующим беременность, а также всем, кто ведет беспорядочную половую жизнь.

Назначают иммуноблоттинг пациентам с ВИЧ, если результаты ИФА вызывают сомнения.

Поводом для обращения к врачу могут стать следующие тревожные симптомы:

  • резкое похудение;
  • слабость, потеря работоспособности;
  • расстройство кишечника (диарея), которое продолжается в течение трех недель;
  • обезвоживание организма;
  • лихорадка;
  • увеличение лимфатических узлов на теле;
  • развитие кандидоза, туберкулеза, пневмонии, токсоплазмоза, обострение герпеса.

Пациенту не нужно подготавливаться перед сдачей венозной крови. За 8-10 часов до исследования нельзя принимать пищу. Не рекомендуется за сутки до сдачи крови употреблять алкогольные и кофейные напитки, заниматься тяжелыми физическими упражнениями, испытывать волнение.

Как проводится исследование?

С точки зрения пациента иммуноблот никак не отличается от любого другого анализа: берется венозная кровь, исследуется и получается результат. Но если вдаться немного подробнее методику, то она очень не простая, но все же попробуем разобраться.

Вначале, на заводе-производителе реактивов, берется «эталонный» вирус иммунодефицита человека. Затем при помощи специальной процедуры (электрофореза) в гелевой среде вирус разрушается до его мельчайших составляющих: белков (антигенов вируса). Затем при помощи самого блоттинга (от англ.

промокания) частицы располагают на специальном материале – нитроцеллюлозе или нейлоновом фильтре, получается готовый к использованию индикатор, так называемый стрип.

Стрип – это полоска, в которой антигены распределены в зависимости от своей молекулярной массы, в четкой последовательности, то есть каждому миллиметру бумаги соответствует определенный белок.

Как вы, возможно, знаете если в крови человека присутствуют вирусы, то организм начинает вырабатывать против их оболочек (определенных белков) антитела, при чем для каждого вируса имеется свой индивидуальный набор белков-антигенов. Выявление антител к белкам-антигенам в крови есть основа метода иммуноблот. Ведь если антитело сталкивается с антигеном, то они непременно взаимодействуют друг с другом – «прилипают».

Так вот, антигены находятся на стрип-полоске и в случае наличия в крови исследуемого подходящих антигенов они обязательно взаимодействуют друг с другом а в этом месте, на стрип полоске, проявится индикатор – появится плоска (как тест на беременность). Причем в конкретном месте полоски, таким образом врач поймет есть ли в крови набор белков характерных для того или иного вируса.

Так, к примеру, при наличии на полоске потемнения в местах локализации белков gp160, gp120, gp41диагностируется ВИЧ, для других вирусов это будут совсем другой набор белков.

Нужно отметь, что иммуноблот позволяет точно установить наличие вируса только в том случае, если набор антител в крови является полным, то есть если белки gp160, gp120, gp41 присутствуют одновременно, то это 100% ВИЧ инфекция. А вот если хотя бы одного нет, к примеру: gp41 отсутствует, а есть только gp160, gp120, то тест расценивается как сомнительный и требует повторения.

Какие стадии включает иммуноблот?

  1. Подготовка стрипа.Предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов вирус иммунодефицита (ВИЧ) подвергается электрофорезу, при этом входящие в состав ВИЧ антигены разделяются по молекулярному весу.

    Затем методом блоттинга (аналог выдавливания на «промокашку» избытка чернил) антигены переносят на полоску нитроцеллюлозы, которая отныне содержит невидимый пока глазом спектр антигенных полос, характерный для ВИЧ.

  2. Исследование пробы.

    На нитроцеллюлозную полоску наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им (комплиментарными) антигенными полосами.

    В результате последующих манипуляций результат этого взаимодействия визуализируется – делается видимым.

  3. Трактовка результата.Наличие полос в на определённых участках нитроцеллюлозной пластины подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ.

  • Полоска А – Положительный контроль
  • Полоска В – Слабоположительный контроль
  • Полоска С – Отрицательный контроль
  • Полоска D – Положительный образец (обнаружено присутствие антител к ВИЧ-1)

Как расшифровать анализ?

Если ИФА показал наличие всех или почти всех антител к антигенам согласно данной тест-системы, это обозначает положительный анализ на ВИЧ.

Если ответ после проведения второго серологического иммуноферментного анализа положительный, то необходимо провести иммуноблот. Расшифровка результатов его будет более верной.

Если иммуноферментный анализ дал положительный результат, следующий анализ иммуноблота так же показал наличие ВИЧ, то ставится заключительный результат.

Когда расшифровываются анализы, то надо знать, что положительный тест на ВИЧ определяется:

  • от 60% до 65% через 28 дней после заражения;
  • в 80% – через 42 дня;
  • в 90% – через 56 дней;
  • в 95% – через 84 дня.

Если получен ответ на ВИЧ положительный, то это будет означать, что выявлены антитела к вирусу. Чтобы избежать ложноположительного ответа, надо сдать повторно анализы, желательно два раза. Если антитела к иммунодефициту выявлены при сдаче двух анализов из двух либо при сдаче 3-х анализов в 2-х из них, то считается, что результат положительный.

Антиген р 24 можно выявить в крови уже через 14 дней со дня заражения. С помощью метода иммуноферментного анализа этот антиген выявляется от 14 до 56 дней. По прошествии 60 дней его в крови уже нет. Только когда в организме формируется СПИД, происходит повторно рост этого белка р24 в крови.

Поэтому тест-системы иммуноферментного анализа используются, чтобы обнаружить ВИЧ в первые дни заражения либо для того, чтобы определить, как протекает заболевание и контролировать процесс лечения.

[attention type=red]

Высокая аналитическая чувствительность иммуноферментного анализа обнаруживает антиген р24 в биологическом материале при ВИЧ первого подтипа в концентрации от 5 до 10 пкг/мл, при ВИЧ второго подтипа от 0,5 нг/мл и меньше.

[/attention]

Под сомнительным результатом иммуноферментного анализа подразумевается, что при диагностировании где-то ошиблись, как правило, что-то перепутали медицинские работники, или у человека есть признаки инфицирования, а результат отрицательный, что вызывает подозрение, человека направляют на повторную сдачу анализа.

Под ложноположительным результатом понимается результат, когда сдача анализов крови была сделана при следующих состояниях больного:

  • беременность;
  • если у человека нарушен гормональный фон;
  • при продолжительной иммунодепрессии.

Как расшифровать анализ в этом случае? Ложноположительный результат ставится, если выявляется хотя бы один белок. Из-за того, что антиген р24 очень зависит от индивидуальных вариаций, то, используя этот метод, в первый период заражения выявляется от 20% до 30% больных.

Насколько достоверен положительный результат теста?

Иногда у ИФА бывают ложноположительные результаты (примерно в 1% случаев), причиной подобного результата может быть беременность, различные вирусные инфекции, а также простая случайность.

После получения положительного результата необходим более точный тест – иммуноблот, по результатам которого и ставится диагноз. Положительный результат иммуноблота после положительного ИФА достоверен на 99,9% – это максимальная точность для любого медицинского теста.

Если иммуноблот отрицательный, значит, первый тест был ложноположительным, и на самом деле ВИЧ у человека нет.

Что такое неопределенный (сомнительный) результат?

Если ИФА бывает положительным или отрицательным, то иммуноблот может быть положительным, отрицательным или неопределенным. Неопределенный результат иммуноблота, т.е.

наличие в иммуноблоте хотя бы одного белка к вирусу, может наблюдаться, если заражение произошло недавно и в крови еще мало антител к ВИЧ, в этом случае иммуноблот станет положительным через некоторое время.

Также неопределенный результат может появиться при отсутствии ВИЧ-инфекции при гепатите, некоторых хронических заболеваниях обменного характера, или при беременности. В этом случае, либо иммуноблот станет отрицательным, либо будет обнаружена причина неопределенного результата.

Сколько стоит анализ?

Иммуноблот на ВИЧ не относится к дешевым исследованиям. В среднем, скрининговое обследование иммуноферментными методами стоит от 500 до 900 рублей.

Иммуноблоттинг – это верификационное исследование, стоимость которого составляет от трех до пяти тысяч рублей. Более сложные методы стоят намного дороже.

Например, за анализ полимеразной цепной реакции (ПЦР) нужно будет заплатить около 12000 рублей.

Где сделать анализ?

Где можно сдать анализ на ВИЧ? ИФА, иммуноблот исследования проводят в городских частных клиниках, результаты выдают в течение суток. Возможна и срочная диагностика.

В государственных медицинских учреждениях анализы ИФА и иммуноблоттинг проводят бесплатно, согласно законодательству РФ.

В обязательном порядке проверку на инфекционные заболевания проходят беременные женщины, а также пациенты, которым предстоит госпитализация или оперативное вмешательство.

Источники

Источник: https://hcv.zydus.su/mogut-li-byt-oshibki-na-immunoblote-vich/

Иммуноблоттинг на ВИЧ – что это, для чего, когда нужен, результаты

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Иммуноблоттинг на ВИЧ – это один из методов диагностики инфекции иммунодефицита. Подчеркнем – один из методов. Да, это высокоточный метод, но в большинстве случаев он применяется как “истина в последней инстанции”.

Диагностические процедуры чаще всего начинаются с ИФА. В случае сомнений в результатах может быть назначена процедура иммунного блоттинга. В любом случае иммуноблоттинг входит в диагностическую цепочку диагностики ВИЧ.

Метод сложный и дорогостоящий. По этой причине его применение обосновано в условиях неопределенности – то ли ставить диагноз, то ли он ложный.

Иммуноблоттинг – что это

Иммуноблоттинг – это методика лабораторных исследований сыворотки крови, позволяющая выявить наличие в крови специфических белковых соединений (антител).

Название метода происходит от английского Blot (пятно). В нашей медицине принят термин “блоттинг”. Поскольку метод относится к сложной теме из молекулярной биологии, подробно его рассматривать не будем. Остановимся только на моментах, которые необходимы для понимания диагностической цепочки.

Справочно. Основным в иммуноблоттинге является выделение необходимых белков из сыворотки крови, нанесение их на носитель с последующим анализом. Чтобы выделенные белки увидеть, их, например, окрашивают в какой-либо цвет (отсюда и пятно).

Метод диагностики иммуноблоттинг применяется для определения различных заболеваний. В диагностике ВИЧ он проявил себя эффективно.

Как проводится

Для проведения иммунного блоттинга используют электрофорез исследуемых белковых структур в полиакриламидном геле.

После того, как произойдет разделение изучаемых антигенов по молекулярному весу, полученный материал переносят на нитроцеллюлозные или PVDF мембраны.

На мембране остается спектр белков, характерный для исследуемого заболевания.

После этого на мембрану наносят сыворотку крови пациента. В случае, если сыворотка содержит необходимые антитела, происходит реакция связывания типа антиген-антитело.

Связывание происходит строго по соответствующим полоскам антигенов на мембране. За счет этого становится возможна визуализация образовавшихся комплексов антиген-антитело.

При положительном анализе иммунного блоттинга появляются видимые полосы на определенных участках мембраны.

Также многие современные методики исследования иммуноблоттинга проводятся при помощи ИФА (иммуноферментный анализ) или иммуноокрашивания.

Для каждого конкретного исследования применяют специфичные к исследуемому белку антитела. За счет этого иммунный блоттинг относится к высокоточным исследованиям с низким уровнем погрешности.

Справочно. Иммуноблоттинг на ВИЧ используется для выявления в крови антител к вирусу иммунодефицита человека.

В некоторых лабораториях вместо классического иммуноблоттинга применяют линейную методику, относящуюся к непрямым иммунологическим исследованиям, позволяющим провести качественную оценку наличия аутоантител класса IgG.

Ифа и иммуноблоттинг на вич

Иммуноферментный анализ (ИФА) относится к лабораторным иммунологическим методам качественной или количественной диагностики в анализе крови специфических соединений (низкомолекулярные соединения, макромолекулы, вирусы).

В основе иммуноферментного анализа лежит реакция антиген-антитело.

При выявлении в анализе указанного комплекса (антиген-антитело) его отмечают с помощью специального фермента.

Иммуноферментный анализ достаточно прост в использовании и отличается высокой точностью. В связи с этим, при диагностике инфекции его применяют в первую очередь.

[attention type=green]

Однако, согласно протоколам диагностики, такой серьезный диагноз на основании результатов одного ИФА не выставляется. Для подтверждения требуется обязательное проведение иммуноблоттинга на ВИЧ.

[/attention]

Справочно. Это связано с тем, что иммунный блоттинг отличается максимальной точностью. При получении нескольких положительных результатов иммуноблоттинга вероятность диагностической ошибки сводится к нулю.

Следует отметить, что в отличие от ИФА, иммунный блоттинг относится к сложным и весьма дорогостоящим методикам диагностики, поэтому он применяется только после получения 2 положительных анализов ИФА.

Если анализ на ВИЧ положительный, что делать

В отличие от ИФА, иммунный блоттинг не дает ложноположительных результатов при наличии у пациента антител к Эпштейн-Барр вирусу, ревматоидному фактору, главным комплексам гистосовместимости HLA, при беременности.

В каких случаях назначается анализ

Анализ на ВИЧ назначается:

  • при выявлении у пациента генитального герпеса, гонореи, сифилиса и других заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП);
  • после незащищенного полового контакта с непроверенным партнером;
  • после нанесения татуировок или татуажа, выполнения пирсинга или проведения инъекционных косметологических процедур в нелицензированных заведениях;
  • после контактов с кровью инфицированного человека;
  • после использования игл, бритв, лезвий или хирургических инструментов, загрязненных биологическим материалом ВИЧ-инфицированного пациента;
  • при плановом обследовании перед получением гражданства, вида на жительство, при прохождении комиссии в военкомате, при прохождении профилактического осмотра перед поступлением в медицинский университет, при плановых профосмотрах (военные, хирурги);
  • при планировании беременности;
  • во время вынашивания ребенка;
  • при выявлении у пациента симптомов ВИЧ инфекции.

Симптомы ВИЧ на первых стадиях не специфичны. Заболевание может проявляться слабостью, постоянной сонливостью, вялостью, периодической лихорадкой, мышечными и суставными болями, хроническими тонзиллитами, увеличением лимфатических узлов, сыпью неясной этиологии.

В редких случаях возможны постоянные головные боли, частая потеря сознания, снижение памяти, развитие энцефалопатии.

Прогрессирует инфекция медленно, поэтому подобная неспецифическая симптоматика может наблюдаться на протяжении от 3 до 7 (и более) лет.

В дальнейшем симптомы проявляются в виде оппортунистических инфекций (сопутствующие инфекционные заболевания, развивающиеся на фоне снижения иммунитета из-за прогрессирующего ВИЧ).

Максимальная эффективность лечения достигается на стадии неспецифических проявлений. Поэтому, при наличии факторов риска заражения (инъекционная наркомания, частые незащищенные половые контакты с непроверенными половыми партнерами и т.д.) требуется регулярно проверяться на ВИЧ.

Иммуноблоттинг на ВИЧ – где сдать

Анализ на иммуноблоттинг можно пройти в центре СПИДа или частных лабораториях. По желанию пациента обследование может быть проведено анонимно.

Антитела к вирусу иммунодефицита человека появляются в крови зараженного человека уже через 2 недели после заражения.

Однако, для получения максимально точных результатов следует провести 2-3 теста на ВИЧ инфекцию. Чаще всего проводят обследование на 6 и 12 неделе после предполагаемого заражения.

Может быть проведено экстренное обследование (при возможности назначения ранней постконтактной профилактики).

[attention type=yellow]

Вероятность выявления положительного иммуноблоттинга на ВИЧ во многом зависит от времени, прошедшего от момента заражения.

[/attention]

Справочно. Через месяц после заражения анализ положителен у 60% пациентов, спустя 45 дней – у 80%, через 3 месяца антитела выявляются практически у 100% инфицированных.

В связи с этим, перед обследованием на ВИЧ требуется проконсультироваться с врачом СПИД-центра. Консультации проводятся анонимно. Специалист расскажет о том, как может передаваться вирус, как предохраняться от заражения, рассчитает срок, когда лучше пройти обследование и сколько раз необходимо сделать анализ.

Также по показаниям может быть назначена ранняя профилактика.

Результат иммуноблоттинга должен трактоваться исключительно специалистом. Самостоятельное назначение обследования в частном центре и расшифровка результатов «по интернету» может привести к диагностическим ошибкам и тяжелейшим последствиям для здоровья.

В СПИД-центре после анализа проводится послетестовая консультация. При выявлении положительного иммуноблоттинга врач назначает дополнительные обследования, на основании результатов которых пациенту подбирается комплексная антиретровирусная терапия.

Как проводится анализ на ВИЧ

Справочно. Согласно официальным протоколам диагностики ВИЧ-инфекции, в первую очередь проводится скрининговое исследование при помощи методики ИФА. Дальнейшая диагностика зависит от результатов первого исследования.

Если ИФА не выявил антител к ВИЧ и вирусных антигенов, обследуемому выдается отрицательный результат. Дальнейшее обследование не выполняется.

Исключение могут составлять случаи, при которых пациент не уверен в точных сроках предполагаемого инфицирования. Для уточнения может быть рекомендовано повторное прохождение теста через 6-12 недель (для исключения ложноотрицательных результатов).

При получении сомнительных или положительных результатов пациент получает направление на дальнейшее обследование в СПИД-центре. После этого проводится еще 1-2 анализа методом ИФА.

При получении двух положительных или сомнительных результатов проводится иммуноблоттинг на ВИЧ инфекцию.

Анализ на ВИЧ. Что делать? Где искать помощи? Когда сдавать анализ?

В дальнейшем врач назначает количественную ПЦР диагностику для определения активности вируса и вирусной нагрузки. Может быть назначена также вирусологическая диагностика, позволяющая идентифицировать тип вируса (ВИЧ1 или ВИЧ2).

Как подготовится к обследованию

Для исследования сыворотки на ВИЧ методом иммуноблоттинга используется венозная кровь.

Забор крови проводится натощак. За два дня до исследования рекомендовано исключить употребление спиртных напитков. Утром перед забором крови не рекомендовано курить.

Также за 1-2 дня до исследования рекомендовано исключить тяжелые физические нагрузки и стрессы.

Иммуноблоттинг – цена

Цена на исследование крови на ВИЧ методом ИФА начинается от 500-700 рублей (цена в частных лабораториях).

Иммуноблоттинг проводят преимущественно в СПИД-центрах по направлению иммунолога. Обследование в специализированных центрах проводится бесплатно.

Тесты для диагностики ВИЧ

Для диагностики ВИЧ существуют тест системы 3-го поколения (без антигенов) и 4-го поколения (с антигенами).

Тест системы первых двух поколений больше не производятся и считаются устаревшими.

На территории Российской Федерации используют только тест-системы четвертого поколения.

Старые тест системы уже не используются, поэтому при правильном прохождении обследования (двукратное ИФА и иммуноблоттинг) вероятность получения ложных результатом сводится к нулю.

Иммуноблоттинг – расшифровка результатов

При получении отрицательных результатов дальнейшее обследование не требуется.

Отрицательные результаты говорят о том, что в крови пациента отсутствуют антитела к двум или трем специфическим гликопротеинам вирусной оболочки ВИЧ (GP41, 120 и 160).

Пациентам с сомнительными результатами исследования рекомендовано повторное обследование через две недели или через 3, 6 и 12 месяцев. Срок повторного обследования определяются иммунологом из СПИД-центра.

Справочно. Получение положительного иммуноблоттинга на ВИЧ означает, что в крови пациента были обнаружены антитела к двум или трем специфическим гликопротеинам вирусной оболочки ВИЧ (GP41, 120 и 160).

Иммуноблоттинг при беременности

Справочно. Беременность может приводить к получению ложноположительных результатов ИФА. Такая ситуация наблюдается достаточно редко, однако, ее необходимо учитывать при трактовке результатов анализа.

В связи с этим, беременным при получении сомнительного или положительного анализа назначают повторный тест ИФА через 2-3 недели.

После этого, при получении повторного сомнительного или положительного результата, назначается иммунный блоттинг на ВИЧ.

При получении отрицательного иммунного блоттинга – ВИЧ исключается. При получении положительных результатов пациентке назначается дополнительное обследование (определение вирусной нагрузки, ПЦР, вирусологическая диагностика, определение уровня СD клеток).

[attention type=red]

В дальнейшем, в зависимости от сроков беременности и результатов дополнительного обследования назначается профилактика передачи вируса плоду. Вся профилактика назначается согласно протоколам ВААРТ.

[/attention]

Для профилактики заражения плода используются специальные препараты, разрешенные для лечения беременных.

У новорожденных, рожденных от матерей с ВИЧ, кровь исследуют методом ПЦР. Выбор метода связан с тем, что методы иммунного блоттинга и ИФА у таких детей не информативны до 18-ти месяцев жизни.

Методики иммунного блоттинга и ИФА у таких новорожденных могут давать ложноположительные результаты из-за выявления материнских антител.

Своевременно начатая профилактика уменьшает риск заражения ребенка. Поэтому для беременных крайне важна своевременная диагностика ВИЧ. В идеале обследование стоит пройти обоим половым партнерам еще на этапе планирования беременности.

Типичные ошибки при диагностике ВИЧ

Основная ошибка – это слишком раннее прохождение тестов (в период «серологического окна» когда в крови еще нет антител).

Внимание. Также к ошибкам относится самоназначение и обследование в частной лаборатории. Без иммунолога сложно подсчитать возможный период «серологического окна» и правильно трактовать результаты обследования.

Еще необходимо учитывать вероятность получения ложноположительных результатов ИФА у беременных и пациентов с вирусом Эпштейн-Барр.

Для исключения ошибок, обследование рекомендовано проходить в СПИД-центре под контролем иммунолога.

Источник: https://testanaliz.ru/immunoblotting-na-vich

Диагностика СПИДа иммуноблотом на ВИЧ. Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Иммуноблот на ВИЧ: случаи ошибок, может ли ошибаться, анализ

Для исключения ошибок при лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции пациенту назначают дополнительное исследование. Его результаты интегрируются как положительные, если обнаружены антитела к 2 или 3 белкам ВИЧ-1 или ВИЧ-2.

Иммуноблот подтверждает все хорошие результаты ИФА. В этом случае обнаруживают антитела к gp120/160, gp41 или р24, которые являются структурными единицами трех основных генов СПИДа — gag, pol, and env.

У некоторых пациентов, имеющих отрицательные результаты ИФА и ПЦР, иммуноблот показывает несколько положительных полосок.

[attention type=yellow]

Врач назначает дополнительное исследование р24 для постановки правильного диагноза и исключения ранней фазы ВИЧ-инфекции.

[/attention]

Если полученные результаты подвергаются сомнению, больному предлагают повторять сдачу анализа в течение последующих 3 месяцев. Почти все случаи заболевания ВИЧ подтверждают с помощью системы для проведения иммуноблота — прибора Sanofi.

В большинстве случаев обнаруживают антигены ВИЧ, белки р25, gp110/120 и gp160, указывающие на инфицирование вирусом.

[attention type=green]

Ложноположительная проба регистрируется у пациентов, страдающих заболеваниями соединительной ткани, имеющих повышенный уровень билирубина, при взаимодействии с различными вирусными антигенами.

[/attention]
Здоровая семья
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: